易得体育下载典范名方是西医发扬和历代医家临床理论的结晶，溶化着各代医家的聪敏【易得体育】，开垦与协商典范名方既无利于传承西医文明，无利于摩登西医药的发扬。 2018 年，国度西医药统制局发布了《现代典范名方名目（第一批）》 [1] ，二冬汤被收录于此中。二冬汤出自清朝程国彭所着的《医学心悟》卷三 [2] ，全方由天冬、麦冬、天花粉、黄芩、知母、甘草、人参、荷叶合成，主治上消，存在养阴清热、生津止渴之成效，临床上常被用于诊疗糖尿病、百日咳、肺结核、耐性支气管炎、阴虚咳嗽等 [3⑻] 。

　　因中药存在多成份、多靶点的特色，检测其所有一种成份均不能代表其集体药效，且因为中药的广大性引导中药质料把握目标宁可无效性联系度低且专属性差等问题，因而刘昌孝院士 [9] 于 2016 年第一次提议了质料象征物（ quality markers ， Q-Marker ）的观念，旨在更好地把握中药材的质料 [10] 。而中药指纹图谱能片面、定额地了解中药所蕴涵的化学消息，是中药质料把握的急迫方法，同时在典范名方物资基准的协商中同样成为急迫方法 [11] 。收集药理学存在集体性、编制性的特色与西医药集体观、辨证论治法则一样，其经过建筑“成份 - 靶点 - 通路”收集拓扑学瓜葛图也许直觉响应药物发扬药效的特色，增补复方临床直接用于生活或生产的的迷信性 [12] 。本协商将指纹图谱与收集药理学相连结，并直接用于生活或生产的好像度评判软件提供和聚类了解，也许愈加编制、片面地对其质料施行把握，猜测其发扬药效的潜伏 Q-Marker ，并同时候析指纹图谱的质料把握目标是不是合理，可为二冬汤后续协商供给可行性参照。

　　2。2。1水煎液的制备 二冬汤始载于清朝程国彭所着的《医学心悟》卷三，文中纪录：“，治上消者，宜润其肺，兼清其胃，二冬汤主之 … 治上消，天冬（二钱，去心），麦冬（三钱，去心），花粉（一钱），黄芩（一钱），知母（一钱），甘草（五分），人参（五分），荷叶一钱，水煎服。”依照西医药统制局公布的现代典范名方关头消息表（ 7 首方子） [13] 并查阅相干文件断定，清朝一钱即是现时 3。73 g ，一钱即是特地。因方中煎服花样唯一“水煎服”，故参考 2009 年国度西医药统制局对于印发的《调理机构中药煎药室统制类型》和相关文件并连结测验室后期测验，断定二冬汤准绳汤剂的制备花样：称取天冬 11。19 g ，麦冬 16。78 g ，天花粉 5。60 g ，黄芩 5。60 g ，知母 5。60 g ，甘草 2。81 g ，人参 2。81 g ，荷叶 5。60 g ，共 55。60 g ，加纯清水 650 mL ，加盖浸泡 30 min ，武火煮沸后转文火煎煮 30 min ，药渣再加 550 mL 水加热煮沸 30 min ，趁热用 100 目滤布滤过，合作 2 次滤液，放冷加自来水定容至 1000 mL 量瓶中，即得。

　　2。2。2混杂比较品的制备 精巧称取新芒果苷、芒果苷、金丝桃苷、黄芩苷、千层纸素 *-O-β-D- 葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷、甘草酸铵适当于 25 mL 量瓶中，加甲醇制成质料浓度分散为 0。128 、 0。048 、 0。040 、 0。072 、 0。052 、 0。048 、 1。960 g/L 的混杂比较品溶液。

　　2。3。1不乱性实验 取统一水煎液 （ S1 ） 供试品溶液，分散在制样后 0 、 2 、 4 、 8 、 12 、 24 h 后测定，以 23 号色谱峰为参考峰（ S ），较量争论各公有峰绝对保持时光的 RSD 均小于 0。6% ，绝对峰面积的 RSD 均小于 4% ，各图谱好像度均大于 0。96 ，阐明供试品溶液在 24 h 内不乱。

　　2。3。2精巧度实验 取统一份水煎液 （ S1 ） 供试品溶液，按上述色谱要求相接进样 6 次，以 23 号色谱峰为参考峰（ S ），较量争论各峰的绝对保持时光的 RSD 均小于 0。4% ，绝对峰面积的 RSD 均小于 3% ，各图谱好像度均大于 0。96 ，阐明仪器精巧度精良。

　　2。3。3反复性实验 取统一水煎液（ S1 ），遵从“ 2。2。3 ”项下花样制备 6 份供试品溶液，按“ 2。1 ”项下色谱要求测定，以 23 号峰为参考峰（ S ），完毕各峰的绝对保持时光的 RSD 均小于 0。4% ，绝对峰面积的 RSD 均小于 5% ，各图谱好像度均大于 0。95 ，阐明该花样反复性精良。

　　取 15 批二冬汤供试品溶液，按“ 2。1 ”项下色谱要求进上进样检测，纪录色谱图。采取“中药色谱指纹谱图好像度评判编制（ 2012 版）”施行数据了解，以 S1 为参考图谱，时光窗宽度设定为 0。1 min ，采取中位数法，施行多点校订和 Mark 峰成婚，天生二冬汤指纹图谱及其比较指纹图谱（公有形式， R ），完毕见图 1 。共标定 26 个公有峰，此中指认 7 个公有峰，分散为 4 号峰新芒果苷、 6 号峰芒果苷、 10 号峰金丝桃苷、 17 号峰黄芩苷、 21 号峰千层纸素 *-O-β-D- 葡萄糖醛酸苷、 23 号峰汉黄芩苷、 26 号峰甘草酸铵。

　　取二冬汤物资基准样本 S1 和缺天冬、缺麦冬、缺天花粉、缺黄芩、缺知母、缺甘草、缺人参、缺荷叶的阳性样本，按“ 2。2。3 ”项下花样制备供试品溶液，按“ 2。1 ”项下色谱要求测定，纪录色谱图。

　　连结色谱峰的保持时光及紫外罗致图，经过相比了解，对 26 个公有峰施行归属，见图 2 。完毕浮现 4 ～ 7 号峰来自知母， 11 、 15 ～ 24 号峰来自黄芩， 1 、 9 、 10 ～ 14 号峰来自荷叶， 25 、 26 号峰来自甘草， 2 、 3 号峰为知母荷叶公有峰，黄芩在该要求下出峰较多，因天冬、麦冬、天花粉成份大多为多糖类，自身药典也无紫外检测，故在本指纹图谱下无进献。

　　HCA 罕用于数据的初阶物色性了解，存在直觉、论断地势简略的特色 [14] 。采取 SPSS 21。0 数据了解软件提供，对 15 批样本的公有峰的峰面积施行编制聚类了解，采取组间对接法，测量区间为平方欧氏间隔，聚类完毕见图 3 ，完毕浮现当欧氏间隔为 10 时，将 15 批二冬汤物资基准可分为 2 类，样本 S1 、 S5 、 S9 、 S11 、 S15 为第 1 类，样本 S2 ～ S4 、 S6 ～ S8 、 S10 、 S12 ～ S15 为第 2 类，阐明分歧产地间药材质料保管肯定的差同性。

　　2。8。1鉴于可测性和可溯性的候选化合物挑选 依照相干文件协商，黄芩严重成份为多糖和黄酮类，黄芩的质料把握目标黄芩苷在把握高血糖中发扬重 要效力，其也许经过增补人体谷胱甘肽过氧化酶（ glutathione peroxidase ， Gpx ）活性，低落三酰甘油与总胆固醇程度，进而改恶人体血糖，汉黄芩苷也为其黄酮类成份，存在抗炎、爱护心脑血管等效力 [15] 。知母的严重成份为皂苷、双苯吡酮类、生物碱类，知母的质料把握目标芒果苷和其余成份如新芒果苷存在精良的降血糖效力 [16] 。甘草严重成份为三萜类、黄酮类、多糖类等其余成份，甘草的把握目标甘草酸存在较好的降血糖、调度免疫和抗动脉粥样化效力 [17] 。荷叶的严重活性成份为生物碱和黄酮类，金丝桃苷存在调脂效力 [18] 。天冬、麦冬、人参严重活性成份为皂苷和多糖类 ，天花粉的活性成份为多糖类。连结文件协商和指纹图谱协商，以上 6 个成份均也许失掉指认和测定，且可以达成饮片到物资基准对应事物的通报。鉴于可测性和可溯性，将以上 6 个化合物动作候选化合物。应用 NCBI 数据（ ）搜索这 6 个候选化合物的 Canonical SMILES ，为后续协商做绸缪。

　　2。8。2二冬汤严重化学成份的靶卵白猜测 将 6 个活性成份的 Canonical SMILES 分散输出 Swiss Target Prediction 数据库（ ）施行其对应靶卵白的猜测，将相干靶卵白施行清理，去除反复靶点，共失掉 6 个活性成份效力的 252 个靶点。

　　2。8。5成份- 靶点- 收集的建立 依照挑选失掉的 6 个成份、 21 个关头靶点和 56 条通路导入 Cytoscape 3。7。1 软件提供，建筑二冬汤“成份 - 靶点 - 收集”收集图，完毕见图 7 ，由图可知，二冬汤效力于多个靶点、多条通路发扬效力。

　　由此可知，收集药理学的猜测完毕与已有文件报导比较一样，证明该协商花样存在肯定切实切性和可取性。同时，这 6 个无效成份可经过效力于多靶点，干扰多条通路发扬药效效力，进一步证明指纹图谱所选的目标成份存在合感性。这 6 个成份也许从饮片 - 煎液达成精良的通报和溯源，且无阳性干预，鉴于 Q-Marker 的五法则，新芒果苷、芒果苷、金丝桃苷、汉黄芩苷、黄芩苷、甘草酸铵都根底适应，故可初阶猜测其为二冬汤潜伏的 Q-Marker 。

　　中药复方成份广大，为对其质料施行片面把握，本测验分散考查了甲醇 - 水、乙腈 - 水、乙腈 -0。1% 磷酸水溶液、甲醇 -0。1% 甲酸水溶液、乙腈 -0。1% 甲酸水溶液 5 种不一样的震动相下色谱峰的辨别景况，完毕浮现震动相为乙腈 - 水、甲醇 - 水时，峰较少，震动相为乙腈 -0。1% 磷酸水溶液、甲醇 -0。1% 甲酸水溶液、乙腈 -0。1% 甲酸水溶液时，峰数目迫近，但乙 腈 -0。1% 甲酸水溶液编制各峰辨别成绩好，故采选乙腈 -0。1% 磷酸水溶液为震动相。同时，对 203 、 230 、 254 、 270 、 290 nm 等分歧检测波长施行了考查，经过较为浮现 203 nm 和 230 nm 基线 nm 中目标性成份甘草酸铵峰面积更高，故采选 254 nm 。此外，考查了色谱柱温度（ 25 、 30 、 35 ℃），体积流量（ 0。8 、 1。0 、 1。2 mL/min ）及分歧表率色谱柱，最后断定上述色谱要求。

　　本协商采取 HPLC 法建筑二冬汤的指纹图谱，挑选出 26 个公有峰，并对 7 个峰施行了指认，经与各单味药阳性色谱图比较，失掉知母、荷叶、黄芩、荷叶 4 味饮片的特点峰，此中开头于黄芩的色谱峰较多，天冬、麦冬、天花粉严重成份为多糖和皂苷类，不齐全紫外检测的特色，经过问题组后期测验，这 4 味药可经过薄层或分光光度法施行辨别。采取好像度评判软件提供连结聚类了解，将 15 批药材分为 2 类，证明分歧产地的药材因景象、海拔等来由会酿成肯定的分裂。指纹图谱动作质料把握的方法之 一，还需连结多目标成份的含量测定、出膏率、大类成份含量测定等花样对典范名方质料施行全方向把握。

　　中药质料是感化中药事迹发扬的关头要素， Q-Marker 鉴于中药化学成份与中药和平性、无效性，采选中药中少许可测性成份动作质料把握目标，提升中药可控性和溯源性，鼓动中药质料的把握协商。本测验鉴于 Q-Marker 可测、特等、无效、通报及配伍“五法则”，首先采取高效液相色谱法建筑准绳汤剂的指纹图谱，并指认出相干峰，猜测出二冬汤或者的质料象征物，再现中药质料的可测性。随即采取收集药理学的花样从无效性方面临 6 个或者的象征物成份施行靶点猜测及相干通路的富集，其严重牵涉卵白酪磷酸酶 N1 、 INSR 、 EGFR 等 21 个靶点，富集的通路征求 FoxO 通路、 PI*K-AKT 等 56 条旗号通路，且牵涉的靶点和通路大多与诊疗糖尿病相干病症相干 [29*0] ，这与古方纪录“诊疗上消”一样，由于糖尿病属于上消规模。但收集药理学仍保管少许限定性，后续仍需求经过少许药理测验施行考证以鼓动二冬汤质料准绳的建筑。

　　综上所述，本测验鉴于指纹图谱和收集药理学协商阐明新芒果苷【易得体育】、芒果苷、金丝桃苷、黄芩苷、汉黄芩苷、甘草酸铵这 6 个成份或者为二冬汤的潜伏 Q-Marker ，为二冬汤质料把握及后续协商供给了参照。

　　来 源：帅丽霞，陈 旺，袁 袁，阮 佳，詹 雁，徐出众．鉴于指纹图谱和收集药理学对典范名方二冬汤质料象征物（Q-Marker）猜测了解 [J]。 中草药， 2022， 53(18)！ 5682**691 。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

   

 

 

 

 

 

 

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